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鸡白痢抗体检测(PD)ELISA试剂盒不同类型样本需要不同方法

发布时间: 2019-03-21  点击次数: 48次
  通常我们可用于鸡白痢抗体检测(PD)ELISA试剂盒检测的样本是有多种类型的,如血清、血浆、尿液、细胞培养上清或组织匀浆液等,其实不同类型的检测样本前期的处理方法是不一样的。
  1、细胞培养上清
  取细胞培养上清到离心管,1000×g离心20min,除去细胞碎片及杂质,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
 

鸡白痢抗体检测(PD)ELISA试剂盒

  2、细胞裂解液
  1)吸去培养板内的培养基,用胰酶消化细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
  2)收集细胞悬液,1000×g离心10min,弃去培养基,用预冷的PBS润洗3次。
  3)加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μLPBS重悬。
  4)将样品放入-20℃或-80℃,使样品冷冻,再放室温解冻样品,反复冻融几次,使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎,以达到裂解的目的。
  3、血清
  血清是zui常用于鸡白痢抗体检测(PD)ELISA试剂盒检测的一类样本,处理也比较简单。
  用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜,使血清析出。(将试管或离心管倾斜放置,使液面横截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃1000×g离心20分钟,仔细收集上清。建议将血清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
  采血过程中应避免溶血,因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的ELISA试剂盒检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
  4、血浆
  用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本,标本采集后30min内4℃1000×g离心15min,取上清即血浆。将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。
  常用的抗凝剂为EDTA、肝素钠和枸橼酸钠等,检测时还应仔细阅读试剂盒说明书,检查试剂盒是否对抗凝剂有特殊要求。
  在鸡白痢抗体检测(PD)ELISA试剂盒中除了包被外,一般需进行45加样。在定性测定中有时不强调加样量的准确性,例如规定为加样一滴。此时应该使用相同口径的滴管,保持准确的加样姿势,使每滴液体的体积基本相同。在定量测定中则加样量应力求准确。标本和结合物的稀释液应按规定配制。加样时应将液体加在孔底,避免加在孔壁上部,并注意不可出现气泡。
  
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